ELISA实验过程中常见问题与解决方法
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    ELISA实验过程中常见问题与解决方法

    更新时间:2016-05-19 11:07:33
    ELISA方法实验常会出现一些结果不好的现象,深圳子科生物技术部总结了常见的几大类问题和对应的解决方案,具体如下:
    一、ELISA实验结果显色淡、 灵敏度偏低
    可能原因与具体解决办法如下:
    1、试剂盒在运输途中时间太长,温度太高
    解决办法:尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温

    2、试剂盒未充分平衡
    解决办法:试剂盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少
    20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃) 。

    3、培养箱温度不足37℃
    解决办法:注意培养箱温度,放入反应板后尽量减少开启次数以免
    影响温度恒定,非隔水式培养箱尤其应注意

    4、保温时间不足
    解决办法:校正定时钟准确定时

    5、洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加
    解决办法:按说明书要求保留洗涤时间,准确记住洗涤次数

    6、移液器吸液量不足,吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁
    解决办法:校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密,吸嘴内壁
    要清洁,最好一次性使用

    7、蒸馏水水质有问题
    解决办法:使用新鲜合格的蒸馏水

    8、底物作用时间不足
    解决办法:准确定时

    二、背景深全部呈有色
    可能原因与具体解决办法如下:

    1、洗涤不充分,洗后未拍干,样品中其它成分残留或酶标记物残留
    解决办法:
    浓缩洗液准确配制;10倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释;充分洗涤,彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用,不要反复使用,否则易造成污染

    2、样品污染
    解决办法:
    样品应新鲜采集,或低温保存,防止污染

    3、培养箱温度超过37℃或反应时间过长
    解决办法:调整培养箱温度,准确定时

    4、吸嘴重复使用,未洗净或消毒不彻底
    解决办法:吸嘴尽可能一次性使用

    5、蒸馏水被污染
    解决办法:使用新鲜蒸馏水

    6、酶等试剂混用
    解决办法:不同批号试剂勿混用

    7、一次实验的标本量过多,加样时间太长, 导致实际反应时间延长
    解决办法:合理安排实验,避免几块酶标板同时加样

    三、重复性不佳
    1、样品数量多少不一,加样时间有长有短    
    解决办法:重复某一样品时,加样时间尽可能与第一次接近

    2、保温时间不一致,洗涤条件不一致,操作人员不一致
    解决办法:重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持
    一致,以排除这些因素造成的不一致的可能性

    3、加样量不一致    
    解决办法: 样品稀释前应充分混匀,尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴

    四、出现白板阳性对照不显色

    1、显色液变质    
    解决办法:更换新的显色液

    2、洗涤液配制有误  
    解决办法: 请按说明书所示稀释倍数配制

    3未加酶结合物而认为已加入  
    解决办法: 注意不要漏加

    4、终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用  
    解决办法: 每次加液前均应看清标签。

    深圳子科生物专业研发生产ELISA试剂盒,如您购买我公司试剂盒后在实验过程中,遇到任何解决不了的问题,都可以随时电话反馈到我们技术部,我们将第一时间帮您解决,助您售后无忧!

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