大鼠D-乳酸ELISA检测试剂盒
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    大鼠D-乳酸ELISA检测试剂盒

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    大鼠D-乳酸ELISA检测试剂盒
    • 详情说明
    • 产品名称:大鼠D-乳酸ELISA检测试剂盒
      货号:ZK-R3050
      英文名称:Rat D-Lactate Dehydrogenase,D-LDH ELISA Kit
      品牌:子科生物ZIKER
      检测方法:酶联免疫分析检测试剂盒
      规格:96T/48T
      包装:盒
      有效期:6个月(4℃);
      保存: 2-8℃(频繁使用时);
      应用范围:仅供科研研究实验使用

      可检测样品形式:血清/血浆/组织匀浆/细胞培养上清/相关生物液体。


      一、检测范围、 OD值:

      具体请咨询在线客服 ,或者来电索要详细说明书!

       

      二、需自备试剂和器材

      1. 标准规格酶标仪。

      2. 自动洗板机。

      3.  37℃恒温箱。

      4. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器。

      5 使用中性 PBS 或 TBS 作为洗涤液。

      6  蒸馏水

      7. 吸水纸。

       

      三、样品的准备和保存

      样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。

      细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

      1.  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

      2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

      3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

      4.  组织匀浆:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

      5.  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,超过2个月冻存于-80℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

       

      四、操作注意事项

      1.  试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

      2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

      3.  浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。

      4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

      5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

      五、洗板方法

      1、手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。

      2、自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

       

      六、实验详细操作程序

      1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

      2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;样本孔加待测样本50μL。

      3.  样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。

      4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

      5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

      6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

      7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

       

      七、结果判断:

      绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

       



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