​一、小鼠IgG1/2a/2b亚类单抗腹水纯化试剂盒

      货号：ZK-B1690Y（50mL纯化量）

二、试剂原理：

本试剂盒利用不同蛋白需要的沉淀试剂和沉淀条件不同，通过大量实验分析验证而得到的一个与传统沉淀纯化相比有较大不同的精细的具有高活性、高产率、快速以及良好重复性的单克隆抗体的纯化方法。

三、试剂特点：

本试剂盒特点在于纯化操作的简单化、所得抗体保持高活性和较高纯度。实验表明，本试剂盒可以得到90%左右纯度的抗体；并且由于配方考究，抗体在纯化过程中几乎没有损伤，完全保持应有的活性；重复性和实际应用极好。

四、适用范围：

本试剂盒适用于小鼠IgG类包含IgG1\IgG2a\IgG2b亚类的单克隆抗体腹水的纯化，不能用于IgG3、IgM和IgA类单克隆抗体腹水的纯化实验，如需要可选择本公司其它货号的纯化试剂，它能为您带来良好的结果。

五、试剂组成：

六、纯化步骤：

1、 从冰箱中取出试剂盒放置室温恢复温度30分钟，期间可将单克隆抗体腹水从冰箱中取出，室温复温15分钟，随后用自来水边冲边摇匀快速解冻。

2、 将化开的单克隆抗体腹水8000-12000RPM， 4℃-37℃温度区间内离心10分钟。

3、 离心完毕上面若有浮沫和油脂先吸弃，然后将上清转出到另一个干净容器或离心管；按每1mL单克隆抗体腹水加入纯化液A（加前确定没有试剂析出，如有析出摇晃溶解即可） 1mL（必须精确），使用摇床或者旋转混匀仪室温到37℃温度区间内混匀30分钟。

4、 8000RPM，4℃-37℃温度区间内离心10-20分钟，沉淀用纯化液B溶解到原单克隆抗体腹水1/2体积，再按此体积每1mL加入纯化液C （加前确定没有试剂析出，如有析出摇晃溶解即可）1mL（（必须精确），使用摇床或者旋转混匀仪室温到37℃温度区间内混匀10分钟。

5、 8000RPM，4℃-37℃温度区间内离心10-20分钟，弃沉淀收集上清；每1mL上清液加纯化液D（加前确定没有试剂析出，如有析出摇晃溶解即可）  1mL（必须精确），使用摇床或者旋转混匀仪室温到37℃温度区间内混匀20分钟。

6、 8000RPM，4℃-37℃温度区间内离心10-20分钟，收集沉淀用纯化液B收集溶解沉淀到原单克隆抗体腹水体积的1/3。透析袋用纯水浸泡3-5分钟，然后用手揉捏数次，接纯水冲洗干净，抗体放入扎好。透析液是用纯水溶解透析试剂到8L（也可先全部溶解到800mL，使用时10X稀释），透析依照抗体体积：透析液体积=1:100以上，4℃透析过夜。收集透析后抗体。

7、 以透析后抗体体积：纯化液E的体积=9：1的比例加入纯化液E摇匀（也就是9体积抗体加1体积纯化液E），静置5min。8000RPM,4℃-37℃温度区间内离心10分钟，弃沉淀收集上清即为纯化好的抗体。

8、 将纯化好的抗体放入用透析夹或绳扎紧。抗体体积：透析液体积=1:50以上；4℃透析，中间换液三次，透析总时间不超过24小时。然后8000RPM, 4℃-37℃温度区间内离心10分钟，收集上清测蛋白浓度后（可添加合适的防腐剂）-20℃存放备用。

七、储存方法：建议避光存放在4℃（或2～8℃），不开启保存效期1年。

八、 注意事项：

1、 溶血严重和变质的腹水不得用于纯化。

2、 离心温度不要超过37℃。

3、 操作和量取试剂要细致精准,否则影响纯度。

4、 不搅拌透析每次静置透析时间不得低于4小时。

5、 如觉得透析太慢可以选择超滤管。