​鹅脱氧胆酸（CDCA）ELISA检测试剂盒

货号：ZK-G7513

规格：48T/96T
​品牌：子科生物ZIKER；
检测方法：酶联免疫-竞争法；
包装：盒；
有效期：6个月；
保存温度： 2-8℃;
应用范围：仅供科研研究实验使用，不可用于临床诊断使用；

检测原理:试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被鹅脱氧胆酸（CDCA）抗原的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的竞争抗原，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的鹅脱氧胆酸（CDCA）呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱

操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结
晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 按照说明书操作时样本已经稀释5 倍，最终结果乘以5 才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

​操作步骤
1. 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔先加待测样本10 μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的竞争抗原50 μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5 次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B 各50 μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50 μL，15min 内，在450nm 波长处测定各孔的OD 值。

结果判断
1. 15分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值；
2. 百分结合率计算：设S0管计数为B0，各标准管或样品管计数为B，非特异管计数为NSB，则百分结合率计算公式如下：B/B0=(B－NSB)/(B0－NSB)×100%
3. log it计算:各标准点或样品管的log it值计算公式如下:log it=ln (B/B0)/(1－B/B0)
4. 将标准品的OD均值与标准品0点的OD均相除，为标准点的百分结合率，在log-log it坐标纸上绘图。
5. Log-log it双对数标准曲线：坐标纸上横轴从左至右第一个1-9表示为第一个10进位，第二个1-9表示为第二个10进位。第三个1-9表示为第三个10进位。坐标纸纵轴为百分比（1-99），即各标准吸光值的百分结合率。取一条通过各点的直线。要求尽可能多的点在线上，同时剩余的点均匀分布在直线的两边。样品也同样由吸光值计算百分结合率，再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点，此点对应的横坐标浓度即为样
品的浓度，无须换算。
6. 人工处理：以标准浓度取log值为横坐标，对应的log it值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横坐标，对应的B/B0为纵坐标在log it-log 坐标纸上画出标准曲线（理想化时是一条直线）。根据待测样品的B/B0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。如果使用普通坐标纸，查出的数值应取反对数才是最后的浓度值。
7. 自动处理：使用log it-log或四参数数据处理模式，由电脑自动计算得出结果。
8. 敏感度：0.01ng/mL

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